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　　与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵 敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够 分离复杂相体中的微量成分PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿。随着固定相的发展, 有可能在充分 保持生化物质活性的条件下完成其分离ღღ◈ღ✿。

　　高效液相色谱仪进样器普遍使用高压进样 阀ღღ◈ღ✿，用微量注射器将样品注入样品环管ღღ◈ღ✿，使 用的样品环管分别有不同的尺寸ღღ◈ღ✿，可根据分 析要求选用ღღ◈ღ✿。当进样阀手柄放在吸液位置 时ღღ◈ღ✿，流动相直接通过孔的通路流向色谱柱ღღ◈ღ✿， 样品通过注射器从另外的位置进入样品环 管ღღ◈ღ✿，如果有过量的样品则会从出口孔排出ღღ◈ღ✿， 然后将手柄转到进样位置ღღ◈ღ✿，此时流动相便将 样品带进了柱子ღღ◈ღ✿。

　　色谱柱是整个色谱系统的心脏ღღ◈ღ✿，它的质量优劣直接影响 到分离的效果ღღ◈ღ✿，一般情况下色谱柱通常采用优质不锈钢 管制成ღღ◈ღ✿，并且柱内壁必须光洁平滑ღღ◈ღ✿，否则内壁的纵向沟 痕和表面多孔性也会引起谱带的展宽ღღ◈ღ✿，柱接头的体积应 尽可能小ღღ◈ღ✿，柱长一般为 10 cm ~25cmღღ◈ღ✿，内径 4 mm ~5mmღღ◈ღ✿。若使用直径为5μm~10μm 固定相颗粒ღღ◈ღ✿，理论塔板 可达到 5×104/mღღ◈ღ✿。尺寸排阻色谱柱的内径通常大于 5mmღღ◈ღ✿，制备色谱柱则会更大 ღღ◈ღ✿；为了减少溶剂用量ღღ◈ღ✿，可采 用微径柱ღღ◈ღ✿，内径为 1mmღღ◈ღ✿，长度为 30mm ~75mmღღ◈ღ✿，若采用 3μm 颗粒ღღ◈ღ✿，理论塔板数高达 1×105/mღღ◈ღ✿。为了保护分析柱 不被污染ღღ◈ღ✿，有时需在分析柱前加一短柱ღღ◈ღ✿，约数厘米长PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿， 此柱称为卫柱ღღ◈ღ✿，为了防止卫柱过分增加柱阻力ღღ◈ღ✿，在卫柱 中使用的颗粒大小约为 10μm ~30μm

　　（2）进样阀的冲洗ღღ◈ღ✿：样品分析完后要冲洗 进样阀ღღ◈ღ✿，避免残留物影响下一次分析ღღ◈ღ✿。高效液 相色谱仪属于精密仪器设备ღღ◈ღ✿，未经过严格培训 的人员不要使用ღღ◈ღ✿。操作时一定要严格按照实验 步骤和仪器设备操作规程进行ღღ◈ღ✿。

　　完全的了解设备可以避免因操作失误而导致仪器损 坏松井沙也香ღღ◈ღ✿，有利于对仪器进行保养ღღ◈ღ✿，高效液相重在保养ღღ◈ღ✿。新 购入设备ღღ◈ღ✿，厂家的技术人员负责进行安装ღღ◈ღ✿、调试ღღ◈ღ✿，这 时候ღღ◈ღ✿，负责高效液相检验的化验员最好选择一种药 物ღღ◈ღ✿，进行完整的演练ღღ◈ღ✿，这样印象深刻ღღ◈ღ✿，省得以后的很 多不确信ღღ◈ღ✿。另外ღღ◈ღ✿，最好在调试的时候由化验员自己重 新安装一下工作站ღღ◈ღ✿，因为在以后的工作中可能会损坏 工作站ღღ◈ღ✿，到时候再打电话咨询就很难说得明白了ღღ◈ღ✿，并 且最好完整记录下安装的步骤ღღ◈ღ✿。

　　分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果ღღ◈ღ✿。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ngღღ◈ღ✿，荧光和电化学检测器可 达0.1pgღღ◈ღ✿。 色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿。 样品量少ღღ◈ღ✿，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏ღღ◈ღ✿，可以收 集单一组分或做制备ღღ◈ღ✿。

　　泵应耐压ღღ◈ღ✿、耐腐蚀ღღ◈ღ✿、密封性好ღღ◈ღ✿。高压泵主要用 于输送流动相ღღ◈ღ✿，其压力一般为几兆帕至数十兆 帕ღღ◈ღ✿。这是液体的黏度比气体大 100 倍ღღ◈ღ✿，同时由 于固定相的颗粒极细ღღ◈ღ✿，柱内压降大ღღ◈ღ✿，为保证一 定的流速ღღ◈ღ✿，必须借助高压迫使流动相通过柱 子ღღ◈ღ✿。高压泵应无脉动或脉动极小ღღ◈ღ✿，以保证输出 的流动相具有恒定的流速ღღ◈ღ✿，同时采用脉动阻尼 装置可将产生的脉动除去ღღ◈ღ✿，使流动相的流量变 动范围不宜超过 2%~3%ღღ◈ღ✿。高压泵主要分为恒 压泵ღღ◈ღ✿、恒流泵和螺旋传动注射泵三类ღღ◈ღ✿。

　　（2）高压输液泵容易出现的问题是ღღ◈ღ✿：①压力升不上去ღღ◈ღ✿：检查一下桌面上是否 有漏下的液滴ღღ◈ღ✿，如果有拧紧漏液处即可ღღ◈ღ✿。②压力过高ღღ◈ღ✿：看一下抽取流动相的 塑料管里是否有气泡ღღ◈ღ✿，如果有ღღ◈ღ✿，则按一下Stopღღ◈ღ✿，这时候千万别抽气泡ღღ◈ღ✿，等压 力降下来ღღ◈ღ✿，最好到0Psiღღ◈ღ✿，这时候抽出气泡PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿。如果在过高的压力下抽气泡ღღ◈ღ✿，后 果会非常严重ღღ◈ღ✿，流通池会被鼓破ღღ◈ღ✿，无法分析样品ღღ◈ღ✿，并且会给你带来很多困 惑ღღ◈ღ✿，当然如果有经验的话会及时发现ღღ◈ღ✿，因为流通池破了后会流出蓝色的墨水 样的液体ღღ◈ღ✿。

　　高效液相色谱仪主要由四大部分组成ღღ◈ღ✿：柱温箱(包括进样阀)ღღ◈ღ✿、高压 输液泵ღღ◈ღ✿、检测器ღღ◈ღ✿、工作站ღღ◈ღ✿。 （1）柱温箱及进样阀容易出现的问题是ღღ◈ღ✿：

　　温控仪失灵ღღ◈ღ✿，不能正确控制柱温箱的温度ღღ◈ღ✿，这时只要更换一下 温控仪就可以了ღღ◈ღ✿，温控仪只在各样品系统适用性试验中有温控要求 时应用ღღ◈ღ✿，如果无要求ღღ◈ღ✿，就不必开启ღღ◈ღ✿；

　　漏液ღღ◈ღ✿，如发现对照品和样品的出峰时间都不规律ღღ◈ღ✿，而且每次的 出峰面积也差别很大ღღ◈ღ✿，根本无法对样品进行定性和定量ღღ◈ღ✿，这时候需 要检查色谱柱和各金属细管的连接处ღღ◈ღ✿，可能是连接处的塑料套因连 接时未按要求而变形了PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿，因其一旦变形就没法修复ღღ◈ღ✿，所以换一个新 的PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿，按要求套上即可ღღ◈ღ✿。

　　HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法ღღ◈ღ✿。因而被广 泛应用到生物化学ღღ◈ღ✿、食品分析ღღ◈ღ✿、医药研究ღღ◈ღ✿、环境分析ღღ◈ღ✿、无机分 析等各种领域松井沙也香ღღ◈ღ✿。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要 的发展方向ღღ◈ღ✿。

　　液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯 农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环 境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染 分析得到新的发展ღღ◈ღ✿。

　　（2）流动相的配制ღღ◈ღ✿：流动相最好现配先用ღღ◈ღ✿，尤其含盐量 高的流动相ღღ◈ღ✿。流动相的抽滤需要注意ღღ◈ღ✿：如果流动相中含有机 溶剂ღღ◈ღ✿，则需要用有机系滤膜ღღ◈ღ✿，若使用水系滤膜ღღ◈ღ✿，则滤膜会被 溶解入流动相ღღ◈ღ✿，流动相只能废掉ღღ◈ღ✿。如果流动相不含有机溶剂 则需要用水系滤膜ღღ◈ღ✿，若用有机系滤膜ღღ◈ღ✿，则再高的压力也抽滤 不下来ღღ◈ღ✿。同一批样品一定要用同一批流动相ღღ◈ღ✿。流动相配制好 后ღღ◈ღ✿，要先抽滤ღღ◈ღ✿，再超声ღღ◈ღ✿。

　　储液器中的流动相被高压泵打入系样品溶液经进样器进入流动相被流动相载入色谱柱固定相由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数在两相中作相对运动时经过反复多次的吸附解吸的分配过程各组分在移动速度上产生较大的差别被分离成单个组分依次从柱内流出通过检测器时样品浓度被转换成电信号传送到记录仪数据以图谱形式打印出来

　　高效液相色谱仪常用的检测器有紫外 吸收ღღ◈ღ✿、示差折光率ღღ◈ღ✿、荧光和安培检测 器等PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿，对它们的要求和性能指标与气 相色谱检测仪基本相同ღღ◈ღ✿。检测器主要 分为紫外吸收检测器ღღ◈ღ✿、荧光检测器和 示差检测器ღღ◈ღ✿。

　　高速——流速为0.1～10.0 mL/minღღ◈ღ✿。 高效——塔板数可达5000/米ღღ◈ღ✿。在一根柱中同时分离成份可达 100种ღღ◈ღ✿。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ngღღ◈ღ✿。同时消耗样品 少ღღ◈ღ✿。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点ღღ◈ღ✿：

　　贮液器是用于存放溶剂的装置ღღ◈ღ✿。贮液器 中的溶剂必须很纯ღღ◈ღ✿，贮液器材料要耐腐 蚀ღღ◈ღ✿，对溶剂呈惰性ღღ◈ღ✿，一般情况下通常采 用1升~2升的大容量玻璃瓶ღღ◈ღ✿，也可采用 不锈钢制成的容器ღღ◈ღ✿，贮液器应配有溶剂 过滤器ღღ◈ღ✿，以防止流动相中的颗粒进入泵 内ღღ◈ღ✿，溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金

　　脱气的目的是为了防止流动相从高压柱 内流出时释放出气泡进入检测器而使噪 声剧增ღღ◈ღ✿，至使不能正常检测松井沙也香ღღ◈ღ✿，一般情况 下通常采用氦气鼓泡来驱除流动相中溶 解的气体ღღ◈ღ✿，因为氦气在各种液体中的溶 解度极低ღღ◈ღ✿，所以必须先用氯气快速清扫 溶剂数分钟ღღ◈ღ✿，然后再使氦气以极小流量 不断流过此溶剂松井沙也香ღღ◈ღ✿。

　　组成PG电子·(中国)官方网站ღღ◈ღ✿。储液器中的流动相被高压泵打入系 统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动 相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液 中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的 吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度 上产生较大的差别, 被分离成单个组分依 次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被 转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形 式打印出来ღღ◈ღ✿。

　　混合物中各组分在 固定相和流动相之 间会发生吸附ღღ◈ღ✿、溶 色素 解或其他亲和作用ღღ◈ღ✿， 这种作用存在差异ღღ◈ღ✿，

　　（3）检测器容易出现的问题ღღ◈ღ✿：①流通池ღღ◈ღ✿：以上已经提过了ღღ◈ღ✿，如果流通池破 了ღღ◈ღ✿，则需要及时更换ღღ◈ღ✿。②氘灯ღღ◈ღ✿：氘灯的寿命一般为2000h松井沙也香ღღ◈ღ✿，如果检测器打不开 了ღღ◈ღ✿，则说明氘灯超过其使用期限ღღ◈ღ✿，需要更换了ღღ◈ღ✿。在日常检测中ღღ◈ღ✿，一般在进样 品之前开启检测器ღღ◈ღ✿，样品分析完毕ღღ◈ღ✿，及时关闭检测器ღღ◈ღ✿，这样可以延长其使用 年限ღღ◈ღ✿，避免不必要的浪费ღღ◈ღ✿。 （4）工作站容易出现的问题ღღ◈ღ✿：安装工作站的电脑一般不要进行其他的工作ღღ◈ღ✿， 一旦出现问题ღღ◈ღ✿，则需重新安装ღღ◈ღ✿。